Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека




НазваниеУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
страница3/25
Дата публикации20.04.2013
Размер2.03 Mb.
ТипМетодические указания
vbibl.ru > Право > Методические указания
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   25


Посевы исследуемого материала на всех этапах выращивают в 1%-й пептонной воде 6 - 8 ч, в пептонной воде с теллуритом калия - 12 - 18 ч, на щелочном агаре - не менее 14 - 16 ч, а на плотных элективных средах - 18 - 24 ч. Теллурит калия следует добавлять в 1%-ю пептонную воду с рН не ниже 8,3 +/- 0,1 до внесения исследуемого материала. Продолжительность хранения рабочего раствора теллурита калия (1:1000) - 7 дней, а питательных сред с теллуритом калия - не более 2-х суток при условии содержания их в холодильнике.
5.2.1. Исследование проб от больных и вибриононосителей секционного материала (рис. 1)
┌────────────────────────────────────────────────┐

Исследуемый материал │

└───┬───────┬─────────────────────────────────┬──┘

\/ \/

\/ ┌────┐──────────────────────────>┌──────────────────┐

┌──────┐ │ I │ ┌────┐ │Ускоренные методы:│

^ ЩА, ЭС│ └─┬──┘──────────>│ II │─────────>│- МФА │

└───┬──┘ │ └─┬──┘ │- РИВ │

\/ \/ │- РНГА │

│ ┌──────┐ ┌────┐ │- ПЦР │

│ │ЩА, ЭС│ │ ЩА │ │ │

│ └──┬───┘ └─┬──┘ │ │

\/ \/ \/ │ │

┌──────────────────────────────────────────┐ │ │

- отбор колоний │ │ │

- высев подозрительных колоний на ЩА и ПУС│ │ │

└────────────────────────────────┬─────────┘ └──────────────────┘

\/

┌─────────────────────────┐

Отбор культур по ПУС и ОП│

└────────────┬────────────┘

\/

┌──────────────┬────────────┬──────────┬─────────┬──────────┐

\/ \/ \/ \/ \/ \/

┌────┐ ┌─────┐ ┌────┐ ┌────┐ ┌────┐ ┌────┐

^ ПУС+│ │ПУС+*│ │ОП+*│ │ПУС-│ │ПУС-│ │ПУС+│

ОП+ │ │ │ │ │ │ОП+ │ │ОП- │ │ОП- │

└─┬──┘ └─────┘ └────┘ └─┬──┘ └─┬──┘ └─┬──┘

└──────────────────┬───────────────────┘ │ \/

\/ \/ ┌─────────┐

+ ┌─────────────────────────────────┐ - ┌─────────┐│Исследуют│

┌─┤ ОРА с сыворотками О1 и О139 ├───┐ │ Не ││ на │

│ └─────────────────────────────────┘ │ │исследуют││кишечную │

│ │ └─────────┘│ группу │

\/ \/ └─────────┘

┌─────────────────────────────────────┐┌─────────────────────────┐

Сокращенная схема идентификации: ││Определение │

- морфология и подвижность микробных ││принадлежности к роду │

клеток ││Vibri, виду V. Cholerae │

- ОП ││или другим видам │

- O/F тест и отношение к отдельным ││патогенных вибрионов │

углеводам и аминокислотам (табл. 4) │└─────────────────────────┘

- МФА │

- РИВ │

- РА с сыворотками О1, Инаба, Огава, │

РО или О139 │

- чувствительность к фагам холерным │

классическому и эльтор │

Ориентировочная оценка эпидемической │

значимости: │

- гемолитическая активность по Грейгу│┌─────────────────────────┐

- чувствительность к фагам холерным ││Условные обозначения: │

+ - ││I и II - среда │

эльтор ctx и ctx ││накопления; ЩА - щелочной│

├─────────────────────────────────────┤│агар; ЭС - элективная │

Дополнительные признаки биовара ││среда для выделения │

V. cholerae: ││холерных вибрионов; ПУС -│

- гемагглютинация; ││полиуглеводная среда; │

- чувствительность к полимиксину В ││ОП - оксидазная проба; │

50 ЕД/мл ││ОРА - ориентировочная │

- реакция Фогес-Проскауэра ││реакция агглютинации; │

├─────────────────────────────────────┤│РА - развернутая реакция │

Определение антибиотикограммы ││агглютинации; МФА - метод│

Окончательная оценка эпидемической ││флюоресцирующих антител; │

значимости: ││РИВ - реакция │

- ПЦР на наличие ctx АБ (А) и tcp А ││иммобилизации вибрионов; │

генов ││РНГА - реакция непрямой │

- токсигенность на кроликах-сосунках ││гемагглютинации; │

├─────────────────────────────────────┤│ПЦР - полимеразная цепная│

Уточнение родовой и видовой ││реакция; │

принадлежности атипичных культур по ││* - в случае отбора │

расширенному набору признаков ││колоний только на ПУС или│

(табл. 2, 3) ││ЩА │

└─────────────────────────────────────┘└─────────────────────────┘
Рис. 1. Схема лабораторного исследования на холеру
I этап

Испражнения, рвотные массы больных, а также содержимое кишечника, желчного пузыря и суспензию кусочков слизистой тонкого кишечника трупа в объеме 0,5 - 1,0 мл засевают пипеткой в 50 - 100 мл накопительной среды, петлей - на щелочной агар и одну из элективных сред (СЭДХ, TCBS).

При исследовании материала от больных с подозрением на заболевание холерой не допускается использование в качестве накопительной среды 1%-й пептонной воды с теллуритом калия.

В случае поступления материала от больных с подозрением на холеру могут быть использованы ускоренные методы исследования: иммуно-люминесцентный, иммобилизация и ПЦР со специфическими праймерами (см. раздел 6) на первом, втором и последующих этапах исследования.

Материал от подозреваемых на вибриононосительство засевают в 50 мл среды накопления при индивидуальных анализах и в 100 мл - при групповых, объединяя в один флакон по 0,5 - 1,0 мл пробы не более чем от 5 человек. К групповым посевам прибегают в редких случаях при проведении массовых обследований на вибриононосительство.

Материал, доставленный в 5 мл 1%-й пептонной воды, полностью используют для посева в 50 мл среды накопления. В случае поступления в лабораторию материала, забранного в 50 мл 1%-й пептонной воды во флаконе, и доставки его не позже 2-х ч после забора пробы, флакон помещают в термостат на 6 ч для накопления возбудителя. При доставке материала в более поздние сроки 5 мл его засевают в 50 мл 1%-й пептонной воды.

В отдельных случаях при бактериологическом исследовании материала от лиц, принимавших антибиотики, активные по отношению к возбудителю холеры, его засевают в 200 - 300 мл 1%-й пептонной воды (предпочтительно в широкогорлые колбы) и на 2 чашки щелочного агара так, чтобы получить рост в виде изолированных колоний. Посевы инкубируют при 37 °С в течение 24 ч, производя последовательные высевы через 8 - 10 ч инкубации с поверхностного слоя среды на пластинки щелочного агара. Использование второй среды обогащения в этом варианте исследования нецелесообразно.

II этап (через 6 - 8 ч от начала исследования)

С первой среды накопления делают высев на щелочной агар и одну из элективных сред и в 5 - 8 мл второй среды накопления. Пересевы в жидкие и на плотные среды делают с поверхности жидкой среды большой бактериологической петлей диаметром 5 мм.

При отрицательных результатах исследования нативного материала ускоренными методами их повторяют после 6 ч инкубации первой среды накопления.

III этап (через 12 - 16 ч от начала исследования)

Высев со второй среды накопления на щелочной агар.

В случае необходимости ускорения хода анализа материала от больного, подозрительного на заболевание холерой, отбор колоний со щелочного агара, засеянного в начале исследования, можно начинать уже на этом этапе, в остальных случаях - на следующем.

IV этап (через 18 - 24 ч от начала исследования)

Отбор подозрительных на холерный вибрион колоний в посевах на плотные среды нативного материала, а также в высевах из 1-й и 2-й накопительных сред.

а) Чашки с посевами просматривают в проходящем свете невооруженным глазом или с помощью лупы, а также (особенно в вечернее и ночное время) под стереоскопическим микроскопом в косо проходящем свете и отбирают подозрительные на вибрионы колонии для выделения и идентификации культуры.

На щелочном агаре колонии холерных вибрионов О1 и О139 серогрупп в типичной S-форме - круглые, гладкие, плоские, голубоватые, гомогенные, с ровными краями, прозрачные в проходящем свете и светло-серые с голубым или зеленоватым оттенком под стереоскопическим микроскопом в косо проходящем свете (Прилож. 5).

Колонии холерных вибрионов на элективных средах TCBS и СЭДХ имеют ярко-желтую окраску на зеленом или синем фоне среды, полупрозрачные. Размеры колоний на щелочном агаре через 10 - 12 ч инкубации обычно не превышают 1 мм, а к 18 - 24 ч достигают 2 - 3 мм в диаметре. Темпы формирования колоний холерных вибрионов на элективных средах несколько замедлены, поэтому просмотр посевов на СЭДХ или TCBS следует проводить не ранее чем через 18 - 20 ч инкубации, когда размеры их становятся близки к колониям, вырастающим на щелочном агаре.

В отдельных случаях в посевах могут также встречаться атипичные колонии: мутные с плотным центром, пигментированные (коричневые или светло-желтые), мельчайшие коккоподобные, шероховатые. Следует иметь в виду, что состав и качество питательных сред оказывают влияние на величину и плотность колоний холерных вибрионов, а также на морфологию клеток.

б) При отборе колоний можно использовать пробу на индофенолоксидазу с однокомпонентным реактивом (без альфа-нафтола) с индикаторными бумажками из набора СИБ-1 для идентификации вибрионов или - тест-системы ОКСИ-тест. С колониями, обнаруженными на элективных средах, пробу на оксидазу ставить не рекомендуется.

в) Подозрительные колонии проверяют в слайд-агглютинации с сывороткой холерной О1 в разведении 1:50 - 1:100. При положительной реакции и достаточном количестве подозрительных колоний ставят слайд-агглютинацию с вариантоспецифическими сыворотками Инаба и Огава в том же разведении, приготавливают мазки для окраски по Граму и обработки флюоресцирующими иммуноглобулинами. При отрицательных результатах колонии, обнаруженные в посевах материала от больных, проверяют в слайд-агглютинации с холерными сыворотками О139 и РО.

Положительная ориентировочная реакция агглютинации с холерной О1 сывороткой в разведении 1:100 и вариантоспецифической в разведении 1:50 или положительная реакция с флюоресцирующими иммуноглобулинами в сочетании с морфологическими, культуральными признаками и специфической иммобилизацией позволяют выдать на соответствующем этапе предварительный ответ об обнаружении в исследуемом материале холерного вибриона О1, а в случае положительной реакции с сывороткой О139 - холерного вибриона О139 серогруппы.

г) Подозрительные на вибрионы колонии, агглютинирующиеся и не агглютинирующиеся холерными О1 и О139 сыворотками, отсевают на одну из полиуглеводных сред (лактозо-сахарозная, Ресселя, Клиглера, маннозо-сахарозная или др.) и (или) на сектор пластинки щелочного агара для выделения чистой культуры, ее идентификации и определения чувствительности к антибиотикам.

V этап (через 24 - 36 ч от начала исследования)
1   2   3   4   5   6   7   8   9   ...   25

Похожие:

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты...
Методические указания предназначены для специалистов органов, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор,...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconПисьмо Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей...
В связи с поступающими обращениями по вопросу оформления удостоверений качества и безопасности пищевой продукции Федеральная служба...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты...
Методические указания предназначены для специалистов органов, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор,...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты...
Н. П. Ефремова); фгун "Центральный нии эпидемиологии" Роспотребнадзора (И. В. Михеева) с учетом предложений и замечаний фгун нии...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты...
Методические указания предназначены для специалистов органов, уполномоченных осуществлять государственный санитарно-эпидемиологический...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconФедеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека письмо
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека информирует, что показатели заболеваемости...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconМетодические рекомендации гигиенические требования к организации...
Управление Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по Омской области

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconМетодические рекомендации и 103. 1-09
Разработаны Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Федеральной службы...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconФедеральный арбитражный суд восточно-сибирского округа постановление...
Управления Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по Красноярскому краю Пучковского...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconПрав потребителей и благополучия человека письмо
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека в целях разъяснения порядка оформления Единой...

Вы можете разместить ссылку на наш сайт:
Школьные материалы


При копировании материала укажите ссылку © 2013
контакты
vbibl.ru
Главная страница