Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека




НазваниеУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
страница20/25
Дата публикации20.04.2013
Размер2.03 Mb.
ТипМетодические указания
vbibl.ru > Право > Методические указания
1   ...   17   18   19   20   21   22   23   24   25


Штатив с пробирками на 1 ч помещают в водяную баню или термостат при температуре (37,0 +/- 0,5) °С, сделав предварительно высев из пробирки контроля культуры на 2 пластинки щелочного агара для определения фактической концентрации живых вибрионов в опытной суспензии (контроль разведения).

Через 1 ч штатив вновь ставят на лед и из каждой пробирки отдельной стерильной пипеткой 0,1 мл культуры высевают на чашку с щелочным агаром рН 7,0 +/- 0,1. Посев равномерно распределяют по поверхности чашки покачиванием или шпателем. Чашки помещают на 18 - 24 ч в термостат при температуре (37,0 +/- 0,5) °С, после чего подсчитывают количество выросших колоний.

В посевах из контрольных пробирок с культурой должно вырастать количество колоний, близкое к контролю разведения.

Вибриоцидным титром считают максимальное разведение сыворотки, которое вызывает гибель не менее чем 50% клеток холерного вибриона, что выявляется при посеве на агаровые пластинки в чашки Петри по сравнению с количеством выросших колоний из пробирки контроля комплемента.

Пример вычисления: при посеве из опытных пробирок с

-1 -2 -3 -4 -5 -6 -7

разведением сыворотки 10 ; 10 ; 10 ; 10 ; 10 ; 10 ; 10 и

т.д. на чашках соответственно выросло 0; 0; 5; 10; 15; 30; 38 и

т.д. колоний. При высеве из пробирки контроля комплемента также

после часовой инкубации при температуре (37,0 +/- 0,5) °С выросло

36 колоний, 50% от этого числа будет составлять 18. Из 5-й

пробирки выросло 15 колоний, т.е. меньше 50% от количества колоний

в контроле (18), в следующей - 30, т.е. более 50% этого же

-5

показателя. Разведение сыворотки в 5-й пробирке составляет 10 ,

следовательно, вибриоцидный титр в данном примере будет составлять

-5

10 .

Определение вибриоцидных антител (ВА) в сыворотке крови на основе ферментации углеводов

Об отсутствии или наличии ВА судят по ферментации сахарозы, регистрируемой с помощью индикатора.

Материалы и оборудование:

- инактивированная сыворотка крови;

- штаммы холерного вибриона серовара Огава и Инаба;

- комплемент, разведенный 1:20 1%-й пептонной водой, содержащей 1% сахарозы и 1% индикатора Андреде;

- термостат на (37,0 +/- 1) °С.

Методика постановки реакции

Комплемент, разведенный 1:20 1%-й пептонной водой с сахарозой

и индикатором Андреде разливают в пробирки по 0,45 мл. В первую

пробирку добавляют 0,05 мл исследуемой сыворотки и после

тщательного перемешивания переносят 0,05 мл смеси во вторую

-5 -9

пробирку, из второй в третью и т.д. (до разведения 10 - 10 ).

Готовят суспензию 18 - 20-часовой агаровой культуры холерного

3

вибриона и разводят 1%-й пептонной водой до концентрации 10

м.к./мл. Во все пробирки вносят по 0,45 мл суспензии и помещают в

термостат.

Постановку реакции сопровождают следующими контролями:

- 0,45 мл 1%-й пептонной воды, содержащей 1% сахарозы и 1% индикатора Андреде + 0,05 мл исследуемой сыворотки + 0,45 мл взвеси культуры - контроль сыворотки;

- 0,45 мл комплемента с сахарозой и индикатором + 0,45 мл культуры - контроль комплемента;

- 0,45 мл 1%-й пептонной воды с сахарозой и индикатором + 0,45 мл культуры - контроль культуры;

- 0,45 мл 1%-й пептонной воды с сахарозой и индикатором + 0,05 мл исследуемой сыворотки - контроль стерильности сыворотки.

Через 5 - 6 ч проводят учет реакции. При этом в контроле (кроме контроля стерильности сыворотки) цвет содержимого пробирок должен перейти в красный или розовый. Изменение цвета индикатора в пробирках рабочего ряда, связанное с ферментацией сахарозы размножившимися вибрионами, свидетельствует об отсутствии вибриоцидных антител в исследуемой сыворотке. За вибриоцидный титр принимают то наибольшее разведение сыворотки, при котором цвет содержимого пробирок остается неизмененным или интенсивность его значительно отличается от окраски контрольных проб. Результат выражают в виде десятичного логарифма разведения сыворотки, взятого с обратным знаком.

Примечание. Для постановки РВА при холере, обусловленной

холерным вибрионом О139 серогруппы, не может быть использован

выделенный в очаге штамм в связи с возможной чувствительностью его

к комплементу. В этих случаях рекомендуется предложенный

-

специалистами Ростовского НИПЧИ, ctx клон холерного вибриона

О139, направленный на депонирование в Государственную коллекцию

патогенных бактерий "Микроб" (РосНИПЧИ "Микроб").
8.3. Определение токсиннейтрализующих

антител в сыворотке крови
Для выявления токсиннейтрализующих антител в сыворотке крови больных холерой и вибриононосителей предназначена РНГА с эритроцитарным холерным энтеротоксическим диагностикумом (ЭХЭД), у которых инфицирование обусловлено холерными вибрионами О1 и О139 серогрупп. Токсиннейтрализующие антитела появляются на 5 - 7-й день болезни, достигая максимума на 14 - 21-й день, затем их титр постепенно снижается, но сохраняется дольше других антител. Иммуноглобулины к холерному токсину в сравнении с вибриоцидными и другими специфическими холерными антителами дольше циркулируют в сыворотке крови после перенесенной инфекции (до 8 - 10 и более месяцев). Условно положительным титром РНГА с ЭХЭД следует считать 1:160 и выше. Целесообразно исследовать парные сыворотки.

Результат РНГА с ЭХЭД позволяет сделать заключение о токсигенности (эпидемичности) циркулирующего в очаге штамма холерного вибриона, в том числе и без выделения культуры.
Приложение 1

(рекомендуемое)
^ НАПРАВЛЕНИЕ ПРОБ ОТ ЛЮДЕЙ

в лабораторию ________________________________________________

для исследования на __________________________________________

от "___" _____________ 200_ г.


N
регист-
рацион-
ный <*>


N
про-
бы


Первич-
ная или
повтор-
ная


Характер
материа-
ла


Ф.И.О.

Воз-
раст


Диаг-
ноз


Адрес
места
житель-
ства


Место
работы


Время
отбора
пробы


Приме-
чание
<**>


1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11



--------------------------------

<*> Регистрационный номер проставляют в лаборатории.

<**> Указать, принимал(а) ли антибиотики (если да - то какие, когда и сколько).
Пробы отбирали: ______________________________________________

__________________________________________________________________

__________________________________________________________________

(Фамиля, И.О., должность) (подписи)

Пробы доставил: ______________________________________________

(Фамиля, И.О., должность) (подпись)

Время доставки проб __________________________________________

(дата, время - часы, минуты)
Приложение 2

(рекомендуемое)
^ НАПРАВЛЕНИЕ ПРОБ ИЗ ОБЪЕКТОВ ОКРУЖАЮЩЕЙ СРЕДЫ
в лабораторию ________________________________________________

для исследования на __________________________________________

от "___" _____________ 200_ г.


N регис-
трацион-
ный <*>


N
пробы


Место
отбора
проб


Объект для
исследования


Характер
материала


Объем
(коли-
чество)


Время отбо-
ра пробы
(ч, мин.)


1

2

3

4

5

6

7


--------------------------------

<*> Регистрационный номер проставляют в лаборатории.
Пробы отбирали: ______________________________________________

__________________________________________________________________

__________________________________________________________________

(Фамиля, И.О., должность) (подписи)

Пробы доставил: ______________________________________________

(Фамиля, И.О., должность) (подпись)

Время доставки проб __________________________________________

(дата, время - часы, минуты)
Приложение 3

(обязательное)
^ УКЛАДКА ДЛЯ ОТБОРА МАТЕРИАЛА ОТ БОЛЬНОГО С ПОДОЗРЕНИЕМ
1   ...   17   18   19   20   21   22   23   24   25

Похожие:

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты...
Методические указания предназначены для специалистов органов, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор,...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconПисьмо Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей...
В связи с поступающими обращениями по вопросу оформления удостоверений качества и безопасности пищевой продукции Федеральная служба...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты...
Методические указания предназначены для специалистов органов, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор,...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты...
Н. П. Ефремова); фгун "Центральный нии эпидемиологии" Роспотребнадзора (И. В. Михеева) с учетом предложений и замечаний фгун нии...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты...
Методические указания предназначены для специалистов органов, уполномоченных осуществлять государственный санитарно-эпидемиологический...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconФедеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека письмо
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека информирует, что показатели заболеваемости...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconМетодические рекомендации гигиенические требования к организации...
Управление Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по Омской области

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconМетодические рекомендации и 103. 1-09
Разработаны Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Федеральной службы...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconФедеральный арбитражный суд восточно-сибирского округа постановление...
Управления Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по Красноярскому краю Пучковского...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconПрав потребителей и благополучия человека письмо
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека в целях разъяснения порядка оформления Единой...

Вы можете разместить ссылку на наш сайт:
Школьные материалы


При копировании материала укажите ссылку © 2013
контакты
vbibl.ru
Главная страница