Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека




НазваниеУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
страница18/25
Дата публикации20.04.2013
Размер2.03 Mb.
ТипМетодические указания
vbibl.ru > Право > Методические указания
1   ...   14   15   16   17   18   19   20   21   ...   25

Натрия хлорид - 5,0

Лактоза - 10,0

Глюкоза - 1,0

Агар-агар - 10,0

Индикатор Андреде - 40 мл

Вода дистиллированная - 1 л

рН 7,3 +/- 0,1.

Среду варят, фильтруют, разливают по 5 - 7 мл в стерильные пробирки и стерилизуют при давлении 0,5 атм. 20 мин. Готовую среду после стерилизации скашивают так, чтобы получить столбик и косяк. Среда светлая.

Среду можно готовить на 1,0 - 1,3%-м питательном агаре, добавляя к нему в соответствующих концентрациях углеводы и индикатор Андреде.

Лакпозо-сахарозная среда

Готовится как и среда Ресселя, но вместо глюкозы берут сахарозу в том же количестве.

Среда Клиглера

1,5 - 1,7%-й мясопептонный агар или другой

слабощелочной питательный агар - 1 л

Лактоза - 10,0

Глюкоза - 1,0

2%-й раствор серно-кислого закисного железа - 10,0 мл

0,8%-й раствор тиосульфата натрия - 10,0 мл

0,4%-й раствор сульфата натрия - 10,0 мл

1%-й раствор фенолового красного - 24,0 мл

рН 7,3 +/- 0,1.

Вначале в расплавленном питательном агаре (рН 7,7 +/- 0,1) растворяют углеводы, затем к нему добавляют свежеприготовленные растворы железа и солей натрия согласно прописи среды (индикатор на сероводород). Кроме того, для регистрации кислотообразования добавляют индикатор феноловый красный. Среду варят, фильтруют, разливают по 5 - 7 мл в стерильные пробирки, стерилизуют 20 мин. при давлении 0,5 атм. и скашивают по типу среды Ресселя; рН готовой среды 7,3 +/- 0,1; цвет красный.

Маннозо-сахарозная среда

1,5%-й питательный агар - 1 л

Манноза - 1,0

Сахароза - 10,0

Серно-кислое железо (FeSO ) - 0,2

4

Гипосульфит натрия (Na SO х 5Н О) - 0,08

2 3 2

Сульфит натрия (Na SO ) - 0,4

2 3

0,2%-й феноловый красный - 10,0.

После расплавления рН среды довести до 8,0, разлить в пробирки по 5 - 7 мл и стерилизовать при 0,7 атм. 15 мин. Готовую среду после стерилизации скашивают так, чтобы получить столбик и косяк.

6) Среды для идентификации.

Среды Гисса

К 100 мл 1%-й пептонной воды (рН 7,3 +/- 0,1) без селитры добавляют 0,5 - 1,0% необходимого углевода или спирта (L-арабиноза, D-манноза, D-сахароза, D-маннит, L-инозит, D-глюкоза, растворимый крахмал и др.) и 1% индикатора Андреде или 0,1 мл 1,6%-го раствора бромтимолового синего. Среды разливают в стерильные пробирки с поплавками и стерилизуют при 0,5 атм. 20 мин.; среду с L-арабинозой следует стерилизовать в течение 20 мин. при 0,1 - 0,2 атм. Для приготовления сред Гисса можно применять только перечисленные изомеры углеводов. Готовые среды Гисса с индикатором Андреде светлые, при кислотообразовании краснеют. Среды с бромтимоловым синим зеленого цвета с травянистым оттенком, при кислой реакции - желтого цвета, при щелочной - синего.

Среда Хью-Лейфсона

Пептон - 2,0

Натрия хлорид - 5,0

Двузамещенный фосфат калия - 0,3

Глюкоза - 10,0

Бромтимоловый синий - 0,03

Агар-агар - 3,0

Дистиллированная вода - 1 л

рН 7,1 +/- 0,1.

К воде добавляют пептон, натрия хлорид и агар-агар. Смесь подогревают до расплавления агара, затем вносят фосфат калия и глюкозу, продолжают кипятить 2 - 3 мин. Смесь подщелачивают 20%-м раствором едкого натрия до рН 7,4 +/- 0,1, доводят объем среды до первоначального и добавляют 3 мл 1%-го водного раствора бромтимолового синего. Затем среду фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают по 4 - 5 мл в стерильные пробирки и стерилизуют при давлении 0,5 атм. 20 мин. Цвет среды до стерилизации синий, а после автоклавирования травянисто-зеленый, рН 7,1 +/- 0,1. При кислой реакции среда желтеет.

Бульон Кларка

Пептон - 5,0

Глюкоза - 5,0

Двузамещенный фосфат калия - 5,0

Дистиллированная вода - 1 л.

Смесь ингредиентов нагревают до полного их растворения, затем фильтруют через бумажный фильтр и разливают по 5 мл в стерильные пробирки. Бульон стерилизуют при давлении 0,5 атм. 20 мин.

Среда Кодама. В 1%-ю пептонную воду добавляют 0,5% растворимого крахмала. Среду разливают в стерильные пробирки и стерилизуют 20 мин. под давлением 0,5 атм. Для оценки результатов расщепления крахмала используют реактив Люголя.

Среда с желатиной. К мясопептонному бульону или бульону Хоттингера прибавляют мелко нарезанную желатину из расчета 10,0 - 15,0 г на 100 мл (летом концентрацию желатины увеличивают до 20%). Желатине дают набухать в течение 30 мин. и затем растворяют при медленном нагревании в водяной бане при температуре (45,0 +/- 5,0) °С. Устанавливают рН 7,1 +/- 0,1, прибавляя к расплавленной желатине 10%-й раствор двууглекислого натрия. При более щелочной реакции желатина застывает плохо, а иногда и совсем не застывает. В 1 л растворенной желатины вносят для просветления два взбитых с небольшим количеством дистиллированной воды яичных белка. Смесь перемешивают и прогревают текучим паром в течение 20 мин. до полного свертывания белка и просветления среды. Затем среду фильтруют в горячем состоянии через бумажный или ватно-марлевый фильтр с большой поверхностью. Среду, разлитую по 5 - 8 мл в пробирки, стерилизуют при давлении 0,5 атм. 20 мин. После стерилизации среду охлаждают путем погружения пробирок в холодную воду в строго вертикальном положении, чтобы верхняя часть столбика при застывании оставалась совершенно ровной.

Среда для определения декарбоксилаз и дигидролаз аминокислот

Пептон - 5,0

Дрожжевой экстракт - 25,0 (сухой 3,0)

Глюкоза - 1,0

Натрия хлорид - 5,0

Натрия карбонат - 0,1

Бромтимоловый синий

(0,1%-й раствор в 20%-м спирте) - 45,0 (0,045 г сухого)

Аминокислота - 10,0 - 20,0

Дистиллированная вода - 1 л

рН 6,4 +/- 0,1.

Все ингредиенты по прописи вышеуказанной среды растворяют при нагревании, устанавливают рН 6,4 +/- 0,1, затем добавляют соответствующий индикатор и делят среду на 4 равные части. В одну часть аминокислоты не добавляют, эта порция служит контролем. В остальные порции вносят соответственно: в первую - 1% лизина, во вторую - 1% орнитина, в третью - 1% аргинина. Аминокислоты должны быть в L-форме, если имеются D-аминокислоты, то добавляют 2%, т.к. микроорганизмы активны только в отношении L-форм. После добавления аминокислот перед стерилизацией в случае необходимости реакцию среды исправляют 0,1%-м раствором соляной кислоты. Среду разливают по 1 - 2 мл в химически чистые стерильные пробирки и стерилизуют при давлении 0,1 - 0,2 атм. 20 мин. Небольшое количество флокулята в средах не имеет значения. Пептонно-дрожжевая среда имеет травянисто-зеленый цвет, при кислой реакции среда желтеет, при щелочной - синеет.

Мясопептонный бульон: мясная вода с 1% сухого пептона и 0,85% поваренной соли. Смесь кипятят до полного растворения пептона и соли, устанавливают нужную реакцию среды, стерилизуют при 0,7 атм. 20 мин.
7.2. Реактивы
а) Для определения образования индола

Реактив Эрлиха:

Парадиметиламинобензальдегид - 1,0 г

Этиловый спирт - 95,0 мл

Концентрированная соляная кислота - 20,0 мл.

Альдегид растворяют в спирте, затем добавляют кислоту, смешивают, хранят в темном месте.

Полоски фильтрованной бумаги пропитывают насыщенным раствором щавелевой кислоты и высушивают в термостате.

б) Для выявления образования сероводорода

Полоски фильтровальной бумаги пропитывают раствором уксусно-кислого свинца. Подсушивают на воздухе.

Полоски индикаторных бумажек на индол и сероводород помещают под пробку пробирки с засеянной культурой. В случае образования индола полоска краснеет, а при образовании сероводорода полоска чернеет.

в) Для определения нитратредуктазы

Готовят отдельно два раствора. Первый - путем растворения при

нагревании в фарфоровой ступке в 20 мл дистиллированной воды 0,2

мг альфа-нафтиламина (C H NH ). Жидкость осторожно вливают в 150

10 7 2

мл 12%-го раствора уксусной кислоты. Второй - 0,5 г сульфаниловой

кислоты (C H NH SO H) растворяют в 150 мл 12%-й уксусной кислоты.

6 4 2 3

Затем оба раствора сливают в темную склянку с хорошо притертой

пробкой. Реактив Грисса должен быть бесцветным, если он розовеет,

то им не пользуются.

Сложность приготовления реактива Грисса, дефицитность и

токсичность входящих в него компонентов (в частности,

альфа-нафтиламина) ограничивают возможности его применения. Этих

недостатков лишен метод с использованием риванолового реактива,

представляющего собой смесь равных объемов 0,1%-го раствора

риванола в дистиллированной воде и 12%-го раствора соляной

кислоты. В случае положительной реакции культура испытуемого

штамма, выращенная в бульоне или 1%-й пептонной воде с 0,1%-м

KNO , окрашивается в красный цвет.

3

г) Для определения бета-галактозидазной активности приготавливают М/75 раствор орто-нитрафенил - бета-Д-галактопиранозида (ОНФГ):

ОНФГ - 80 мг

Дистиллированная вода - 75 мл

Фосфатный буфер - 5 мл.

Растворяют в дистиллированной воде при 37 °С ОНФГ, затем

добавляют раствор однозамещенного фосфорно-кислого натрия

(NaH PO х H O). Доводят рН до 7,0. Раствор должен быть бесцветным

2 4 2

- хранят при температуре -4 °С. Перед использованием раствор

выдерживают в течение нескольких минут до растворения фосфата,

который на холоде кристаллизируется.
7.3. Консерванты для сохранения дефибринированной крови
а) Консервант с борной кислотой

Борная кислота - 40,0 г

Глюкоза - 50,0 г

0,9%-й раствор натрия хлорида - до 1 л.

Стерилизуют на водяной бане или текучим паром при 100 °С по 20 мин. в течение 3-х дней.
1   ...   14   15   16   17   18   19   20   21   ...   25

Похожие:

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты...
Методические указания предназначены для специалистов органов, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор,...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconПисьмо Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей...
В связи с поступающими обращениями по вопросу оформления удостоверений качества и безопасности пищевой продукции Федеральная служба...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты...
Методические указания предназначены для специалистов органов, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор,...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты...
Н. П. Ефремова); фгун "Центральный нии эпидемиологии" Роспотребнадзора (И. В. Михеева) с учетом предложений и замечаний фгун нии...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты...
Методические указания предназначены для специалистов органов, уполномоченных осуществлять государственный санитарно-эпидемиологический...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconФедеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека письмо
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека информирует, что показатели заболеваемости...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconМетодические рекомендации гигиенические требования к организации...
Управление Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по Омской области

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconМетодические рекомендации и 103. 1-09
Разработаны Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Федеральной службы...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconФедеральный арбитражный суд восточно-сибирского округа постановление...
Управления Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по Красноярскому краю Пучковского...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconПрав потребителей и благополучия человека письмо
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека в целях разъяснения порядка оформления Единой...

Вы можете разместить ссылку на наш сайт:
Школьные материалы


При копировании материала укажите ссылку © 2013
контакты
vbibl.ru
Главная страница