Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека




НазваниеУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека
страница7/15
Дата публикации06.04.2013
Размер1.08 Mb.
ТипМетодические указания
vbibl.ru > Медицина > Методические указания
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   ...   15


- период эпидемического риска, к которому относятся весенние месяцы (март, апрель, май);

- зимние месяцы в случае потепления (положительная температура воздуха) и, как следствие, таяние снега;

- период сезонного подъема заболеваемости гепатитом A, который определяется на каждой конкретной территории по данным эпидемиологического анализа.

Кратность отбора проб: 2 раза в месяц.

Точки отбора проб:

а) вода поверхностных водоемов в местах водозабора;

б) резервуары чистой воды фильтростанций с источником водоснабжения из поверхностных водоемов.

2. При авариях или нарушениях в системах водоснабжения и/или канализации.

Кратность: при аварии - после устранения неисправности и дезинфекции.

Точки отбора проб:

а) распределительная сеть в местах возможного вирусного загрязнения.

3. В случаях спуска неочищенных или недостаточно очищенных от вируса гепатита A сточных вод в открытые водоемы, являющиеся водозабором для водоснабжения территорий, находящихся ниже по течению.

Кратность: определяется периодом времени с учетом расстояния от спуска неочищенных вод до водозабора и скорости течения реки.

Точки отбора проб:

а) место водозабора;

б) резервуар чистой воды.

4. По санитарно-эпидемиологическим показаниям:

- повышение уровня заболеваемости гепатитом A или иными кишечными инфекциями на территории или отдельных участках;

- наличие предвестников:

а) повышение заболеваемости гепатитом A в первом квартале текущего года по сравнению с аналогичным периодом предыдущего года;

б) повышение уровня иммунной прослойки в возрастной группе 1 - 4 и 5 - 9 лет по данным динамического наблюдения за иммуноструктурой к ВГA населения данной территории. Рост доли иммунных в возрастной группе 1 - 9 лет является показателем активизации циркуляции вируса гепатита A в популяции и, возможно, повышения вирулентных свойств возбудителя. При соответствующих условиях (иммунная прослойка к ВГA совокупного населения < 70%; контаминация воды малыми дозами вируса гепатита A) может привести к значительному росту заболеваемости;

- во время вспышечной заболеваемости гепатитом A.

Кратность отбора проб: еженедельно и/или по эпидпоказаниям.

Точки отбора проб: водоисточники или РЧВ распределительная сеть в зависимости от эпидситуации.
III. Производственный санитарно-вирусологический контроль
Проводится постоянно, согласно МУК 4.2.2029-05. Он предусматривает исследования воды водных объектов:

- в организациях водоснабжения на этапах водоподготовки, выходе с водоочистительных сооружений (после обеззараживания), в разводящей сети;

- в организациях по производству воды, расфасованной в емкости;

- при выборе водоисточника;

- при оценке эффективности работы обеззараживающих установок, режима их работы;

- при повышении нормативов уровня колифагов, либо при обнаружении антигенов ВГA.
IV. Методы отбора проб
1. Вода из водопроводной сети, РЧВ, скважин, колодцев, плавательных бассейнов, бутилированная вода берется в объеме 5 - 10 л для метода концентрирования вирусов с использованием фильтрационных мембран (МУК 4.2.2029-05). Дополнительно к МУК рекомендуется использование полиамидных мембран с положительным потенциалом (ММПА+), что на один порядок повышает эффективность концентрирования вируса гепатита A.

2. Сточные воды, вода поверхностных водоемов пропускаются через установку с флизелиновыми пакетами с макропористым стеклом в течение 3 - 7 суток. Во время вспышечной заболеваемости гепатитом A целесообразно использовать метод концентрирования вирусов из воды распределительной сети с помощью флизелиновых пакетов с макропористым стеклом, с установкой их в протоке воды минимально на 3 суток, что позволяет исследовать кумулятивную пробу.
V. Определение РНК ВГA
Для индикации возбудителя ОГA в концентратах водных проб определяют РНК ВГA методом ПЦР. Выявление РНК ВГA проводят лаборатории, организации, структурные подразделения, оснащенные необходимым оборудованием и имеющие санитарно-эпидемиологическое заключение и лицензию на выполнение работ с микроорганизмами III - IV групп патогенности.

Выявление РНК проводится с использованием зарегистрированных коммерческих наборов реагентов, в состав которых входит внутренний контрольный образец (ВКО), методом ПЦР с электрофоретической детекцией продуктов амплификации в агарозном геле или с гибридизационно-флуоресцентной детекцией, которая проводится непосредственно в ходе ПЦР (ПЦР в режиме реального времени), или после завершения ПЦР (детекция по конечной точке). Исследование и интерпретация полученных в ходе его проведения результатов осуществляется в соответствии с инструкцией к используемому набору реагентов.
Приложение 2
^ КОНЦЕНТРИРОВАНИЕ ВГA ИЗ ВОДЫ
Оборудование
Весы лабораторные 2-го класса точности

с наибольшим пределом взвешивания 200 г ГОСТ 24104-01

PH-метр любой марки с набором электродов

с погрешностью измерений +/- 0,1

Дистиллятор электрический ДЭ-4

Центрифуга лабораторная рефрижераторная,

например, ЦЛР-1МРТУ-42-2145

Холодильник бытовой электрический

с температурой в камере 4 - 6 °C

Холодильник бытовой электрический

низкотемпературный с температурой

в камере -20 °C

Проточный мембранный фильтрующий модуль

с тангенциально-радиальным движением

жидкости МФМ 0142 ТУ 3614-005-32915592-05

Мембрана микропористая капроновая ММК -

диаметр пор 0,2 мкм ТУ 9471-002-10471723-03

Шприцы емкостью 20 мл одноразовые, стерильные,

отечественного или импортного производства

Шприцевые насадки для фильтров (маленькие,

разъемные)
Реактивы
Биф-экстракт (Sigma, хч)

Трисбуфер (трис(гидроксиметил) аминометан)

(Serva, хч)

Полиэтиленгликоль (ПЭГ М.в. 6000) импортного

или отечественного производства

Соляная кислота ГОСТ 14261-77

Натрия гидроокись ГОСТ 4328-77

Вода дистиллированная ГОСТ 6709-72

Спирт этиловый ректификованный ГОСТ 5962-67

Перекись водорода 33% ГОСТ 177-88
Приготовление элюента
10-кратный раствор трисбуфера

Раствор готовят на дистиллированной воде. 30,3 г триса (трис(гидроксиметил) аминометан) (Serva, хч) растворяют в 300 - 400 мл воды, доводят значение pH до 9,1 концентрированной соляной кислотой и оставляют на сутки. Затем проверяют pH и при необходимости доводят еще раз значение pH до 9,1. Конечный объем раствора получают добавлением дистиллированной воды до объема 500 мл.

Рабочее разведение трисбуфера получают добавлением 9 частей стерильной дистиллированной воды к 1 части концентрированного раствора.

Приготовление 3% бифэкстракта на трисбуфере

К 100 мл рабочего раствора трисбуфера добавляют 3 г мясного экстракта (бифэкстракт) (Sigma, хч) и доводят значение pH до 9,1 - 9,5 однонормальным раствором гидроокиси натрия.

Оптимальным методом концентрирования вирусов в настоящее время является метод мембранной фильтрации различных объемов воды. При этом в немалой степени эффективность концентрирования вирусов зависит от степени загрязнения воды, вида мембран, характеристик фильтровальной установки, типа фильтрации.

Одним из перспективных вариантов фильтровальных установок отечественного производства является проточный мембранный фильтрующий модуль МФМ 0142 с тангенциально радиальным движением жидкости, разработанный ООО НПП "Технофильтр" с использованием электропозитивных мембран, которые изготавливаются ООО НПП "Технофильтр" ТУ 3697-002-10471723-03.

В модифицированном варианте модуль состоит из верхней и нижней тарелок, между которыми зажимается электропозитивная мембрана ММК. Модуль устанавливается на треноге. Штуцер шланга для подачи исходной воды из расходной емкости соединяется со стыковочным штуцером. Фильтрат отводится через отводящую трубку.

Перед проведением исследований верхнюю и нижнюю тарелки фламбируют, между ними (после остывания) помещают электропозитивную мембрану ММК, которую смачивают стерильной дистиллированной водой и зажимают между тарелками специальным устройством. Затем в расходную емкость заливают исследуемую воду и закрывают герметично крышкой, на которой размещается манометр для контроля давления в емкости.

При работе модуля исследуемая вода проходит под давлением вдоль поверхности мембраны в закрытой системе в режиме тангенциального потока, при этом неотфильтрованный продукт возвращается в цикл, а фильтрат удаляется. Накопление вирусов на мембране обеспечивается за счет сепарационных и сорбционных процессов.

После окончания фильтрации вирусы элюируют с поверхности мембраны путем их смыва в закрытом режиме при помощи подсоединения двух стерильных шприцев объемом 20 мл. Смыв вирусов проводится 3-кратно (по 20 мл) общим объемом элюента 60 мл. В качестве элюента используют 3%-й бифэкстракт на трисбуфере с pH 9,0 - 9,4. После проведения элюции pH элюата доводят до значений 7,0 - 7,2 с помощью 1%-го раствора соляной кислоты.

Для получения надежных результатов, свидетельствующих о наличии или отсутствии вирусов в воде, необходимо исследование всего объема элюата, в данном случае 60 мл, т.к. содержание вирусов даже после концентрирования, как правило, может не превышать единичных вирионов в мл элюата. В то же время существующие методы выделения вирусов на клеточных культурах из-за высокой стоимости и трудоемкости не позволяют исследовать полностью полученный элюат.

В этой связи, с целью максимального уменьшения объема полученного элюата, вводится этап вторичного концентрирования. В настоящее время для вторичного концентрирования наиболее широко применяют метод ультрацентрифугирования или осаждение вирусов полиэтиленгликолем. В соответствии с методикой в полученный элюат (60 мл) добавляют ПЭГ (М.в. 6000) и хлористый натрий до конечных концентраций соответственно 10% и 0,5 М. Смесь тщательно перемешивают до растворения ПЭГ и затем выдерживают в течение 10 - 12 ч при 4 °C. Образовавшуюся суспензию центрифугируют при 10 000 g в течение 1 ч или при 6 000 g в течение 2 ч. Надосадочную жидкость удаляют, а осадок ресуспендируют в 6 мл стерильной дистиллированной воды. Полученный объем полностью используют для выделения вирусов на клеточной культуре и РНК/ДНК в ПЦР.

Таким образом, введение этапа вторичного концентрирования вирусов при помощи ПЭГ 6000 позволяет уменьшить объем первичного элюата в 10 раз, который в полном объеме может быть использован для выделения вирусов на различных культурах клеток и определения РНК и ДНК в ОТ-ПЦР. Высокая эффективность выделения вирусов из воды при использовании как фильтрующего модуля МФМ 0142, так и его модификации позволили включить в схему детекции вируса гепатита A оба варианта фильтрационных установок (рис. 1).
1   2   3   4   5   6   7   8   9   10   ...   15

Похожие:

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты...
Причерноморская противочумная станция (Г. В. Гальцева); Государственным Центром по антибиотикам (С. В. Сидоренко); Российской медицинской...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconПисьмо Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей...
В связи с поступающими обращениями по вопросу оформления удостоверений качества и безопасности пищевой продукции Федеральная служба...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты...
Методические указания предназначены для специалистов органов, осуществляющих государственный санитарно-эпидемиологический надзор,...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты...
Н. П. Ефремова); фгун "Центральный нии эпидемиологии" Роспотребнадзора (И. В. Михеева) с учетом предложений и замечаний фгун нии...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconУтверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты...
Методические указания предназначены для специалистов органов, уполномоченных осуществлять государственный санитарно-эпидемиологический...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconФедеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека письмо
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека информирует, что показатели заболеваемости...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconМетодические рекомендации гигиенические требования к организации...
Управление Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по Омской области

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconМетодические рекомендации и 103. 1-09
Разработаны Федеральным государственным учреждением здравоохранения "Федеральный центр гигиены и эпидемиологии" Федеральной службы...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconФедеральный арбитражный суд восточно-сибирского округа постановление...
Управления Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека по Красноярскому краю Пучковского...

Утверждаю Руководитель Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека iconПрав потребителей и благополучия человека письмо
Федеральная служба по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека в целях разъяснения порядка оформления Единой...

Вы можете разместить ссылку на наш сайт:
Школьные материалы


При копировании материала укажите ссылку © 2013
контакты
vbibl.ru
Главная страница